رو ش¬های همسانه سازی ژن بدون آنزیم لیگاز

همسانه­سازی قطعه dna موردنظر داخل یک ناقل پلاسمیدی، یکی از مراحل تکنولوژی dna نوترکیب است. در روش­های معمول برای همسانه­سازی به آنزیم لیگاز و آنزیم­های برشی نیاز است که با محدودیت­هایی مواجه هستند. راه­کارهای متعددی برای ایجاد و اتصال دو قطعه dna مستقل بدون استفاده از آنزیم لیگاز توسعه یافته­اند که از موفق­ترین آن­ها فناوری­های گیت­وی و یوزرفرندلی هستند. فناوری گیت وی روشی سریع و مؤثر برای همسانه سازی بر اساس خصوصیت­های نواحی ویژه نوترکیبی باکتریوفاژ لامبدا است. در این فناوری، اجزای سیستم نوترکیب این ویروس برای ایجاد یک سیستم کارآمدتر تغییر یافته اند. نوترکیبی بین نواحی ویژه اتصال رخ می­دهد که دو طرف قطعه dna را احاطه می­کنند. در این فناوری توالی dna مورد نظر ابتدا در یک ناقل به نام ناقل ورودی همسانه سازی می­شود. پس از ایجاد کلون ورودی، انتقال قطعه dna به ناقل های دیگر با واکنش نوترکیبی یک ساعته و بدون استفاده از آنزیم­های برشی و آنزیم­های اتصال دهنده لیگاز به­راحتی انجام می گیرد. در فناوری یوزرفرندلی از آغازگرهایی استفاده می­شود که دارای توالی ناقل هستند و یک نوکلئوتید داکسی اوریدین دارند و dna هدف را با پلیمرازی نظیر تک پلیمراز تکثیر می­کنند. محصول pcr با مخلوط آنزیمی ویژه­ای تیمار می­شودکه انتهای 3َ تک رشته­ای بر روی قطعات dna تکثیر شده با pcr ایجاد می­کند. با این عمل قطعات dna داری دنباله­های تک رشته­ای طویل­تر از محصولاتی هستند که با آنزیم­های برشی ایجاد می­شوند و برای اتصال به ناقل به آنزیم لیگاز نیازی نیست. با تغییر در طراحی آغازگرها در این روش همسانه­سازی به راحتی دست­کاری­های مختلف dna  امکان­پذیر است. در این مقاله به جنبه­های کلیدی و مزایای این روش­ها پرداخته شده است.